新疆石河子地区牛支原体的分离鉴定及药物敏感性分析

【目的】确定引起新疆石河子地区集约化牛场常发性肺炎的主要病原同时进行病原的体外药物敏感性分析。【方法】采集有典型咳嗽、流涕症状的牛鼻拭子10份和病死牛肺脏组织1份,用牛支原体特异性引物进行PCR检测,将检测为阳性的样本进行病原培养纯化,对纯化后的分离株菌落进行形态学观察、Dienes染色、生化试验及16S rRNA测序和进化分析,通过测定颜色变化单位(CCU)测定分离株生长曲线,并对分离株进行药物敏感性试验。【结果】PCR结果显示,10份鼻拭子中检测出7份牛支原体阳性样本,1份病死牛肺脏组织也检测为阳性;在涂有肺脏组织研磨液培养液的PPLO固体培养基上长出针尖状的菌落,纯化后分离株菌落形态为典型的煎蛋状;Dienes染色可见明显的深蓝色中心脐;生化试验结果显示,分离株不水解明胶、精氨酸、七叶苷,不发酵乳糖、葡萄糖和甘露醇,不分解尿素,可还原氯化三苯基四氮唑;16S rRNA测序结果显示,分离株与牛支原体国际标准株PG45相似性为99.7%,与国内牛支原体地方流行株XBY01、Ningxia-1、NM2012、Tibet-10的相似性最高,均为99.9%;生长曲线测定结果显示,分离株在培养基中生长6 h后进入对数生长期,54 h时达到高峰进入稳定期,72 h后进入衰亡期;药物敏感性试验结果显示,分离株对呋喃妥因、四环素和多西环素、庆大霉素和卡那霉素敏感,对诺氟沙星和氧氟沙星中介,而对环丙沙星、洛美沙星及阿奇霉素和红霉素耐药。【结论】本研究成功从肺脏组织中分离鉴定出1株牛支原体,培养54 h是该分离株的最佳收获时间,与国内大多数牛支原体地方流行株差异较小,整体遗传进化相对稳定,有一定的耐药性,本研究结果可为当地对牛支原体的防控提供参考,也为牛支原体致病机制研究及疫苗研发奠定基础。     

华北刺槐林与自然恢复植被土壤微生物量碳、氮含量四季动态

【目的】土壤微生物量碳、氮是植被所需碳、氮的重要“源”或“库”,是公认的综合评价土壤质量或肥力的重要指标,也是土壤生态系统变化的预警及敏感指标,研究其动态变化,可为退耕还林及后期管理决策提供科学依据,并为深入研究林地碳氮循环及温室气体排放提供参考。【方法】以农田( FL)为对照,研究华北土石山区10年生刺槐林、43年生刺槐林、自然恢复植被( NRV)土壤微生物量碳、氮的四季动态变化,并对各样地微生物量碳、氮对土壤营养库的贡献率进行对比研究。【结果】各样地微生物量碳、氮随土层加深而逐渐下降,其季节动态变化差异显著;农田、自然恢复植被、10和43年生刺槐林地0～20 cm 土层微生物量碳、氮含量四季均值分别为251.94,290.68,150.66,197.34 mg·kg －1和30.95,46.46,36.55,45.27 mg·kg －1。其中：自然恢复植被的微生物量碳、氮含量四季均值最高,其微生物量碳含量分别是农田、10和43年生刺槐林的1.15,1.93和1.47倍,微生物量氮含量分别是它们的1.50,1.27和1.03倍;土壤微生物量碳、氮含量随刺槐树龄增大而升高,43年生刺槐林0～20 cm 土层的微生物量碳、氮含量是10年生刺槐林的1.31和1.24倍。各植被样地不同层次土壤微生物量碳氮比季节差异明显,农田、自然恢复植被、10年和43年生刺槐林 0～20 cm 土层碳氮比四季均值分别为8.64,6.26,4.12 和4.36;10,43年生刺槐林碳氮比分别是农田的0.48和0.50倍,是自然恢复植被的0.66和0.70倍。在 0～20 cm 土层中,农田、自然恢复植被、10和43年生刺槐林地微生物量碳对土壤有机碳平均贡献率分别为1.88%,2.00%,1.54%和1.24%,土壤微生物量氮对土壤全氮的平均贡献率分别为1.21%,5.44%,3.55%和2.26%。【结论】各样地土壤微生物量碳、氮之间显著相关,它们与土壤全氮、有机质和速效钾含量均显著相关;除此之外,土壤微生物量碳还与土壤硝态氮含量显著相关。随着树龄的增加刺槐林土壤微生物量尤其是微生物量氮含量显著提高,因而土壤的生物肥力也显著提高;由土壤微生物量碳、氮含量及其对土壤营养库的贡献率可知,自然恢复植被更利于土壤微生物结构、功能的恢复和生物活性的改善。     

一种适于PCR和LAMP检测的松木中松材线虫DNA快速提取方法

【目的】本研究旨在探索快速、简便地直接从病木中提取松材线虫 DNA 的方法。【方法】运用 Chelex-100结合异硫氰酸胍蛋白变性缓冲液建立新的高效快速提取微量木块中线虫 DNA 的方法,并通过普通 PCR 与环介导等温扩增( LAMP)对提取的 DNA进行检测验证。【结果】建立了提取线虫 DNA 的新方法 Chelex-100法,并对影响提取效率的Chelex-100浓度、冻融时间和煮沸时间进行了优化。Chelex-100法最适Chelex-100终浓度为1.5%( W/V),最适冻融时间为5 min,最适煮沸时间为8 min。与传统的 CTAB法和蛋白酶 K 法比较,Chelex-100法提取的 DNA得率高,相同条件下,该方法提取的 DNA浓度远远大于常规方法。3种方法的 OD260/280比值从大到小依次为CTAB法＞蛋白酶K法≥Chelex-100法,Chelex-100法的OD260/280值显著低于CTAB法,而略低于或等同于蛋白酶K法,但这并不影响对提取的 DNA 进行 PCR 扩增。采用 Chelex-100法提取松木中松材线虫的 DNA,结合常规的PCR和 LAMP检测,检测灵敏度高,特异性强,稳定性好;提取的松材线虫 DNA 的75倍稀释液再稀释32倍后进行PCR扩增,扩增产物电泳依然有清晰的条带。用新方法提取病木中线虫的 DNA 后进行检测,所有带病松木样品的检测结果均呈阳性,而健康黑松、马尾松、油松木屑及盘多毛孢样品的检测结果均呈阴性。此外,该提取方法简便快速,20 min内即可完成整个 DNA的提取;经济方便,试剂保藏无特殊要求,单个样品提取耗费低于3.5元。【结论】Chelex-100法是一种快速有效的提取松木中松材线虫DNA的方法,此方法结合PCR和LAMP检测技术将进一步提高松材线虫的检测效率、灵敏度和准确性,可为松材线虫的野外检测提供可靠的技术依据。     

双向电泳在植物蛋白质组中的应用及影响因素分析

双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)是蛋白质组学研究中常用的技术之一,因具有较高的稳定性和重复性,在植物蛋白质组学中应用广泛。蛋白质双向电泳(2-DE)过程复杂、时间持久以及影响因素众多,本文立足蛋白质双向电泳实验过程中可能出现的各种现象,如：分离的蛋白质点过少、条纹过多导致凝胶背景模糊、高丰度蛋白点聚集沉淀及低丰度蛋白点被掩盖等,着重分析其产生的原因并提出具体的解决办法,为蛋白质双向电泳技术初学者提供参考。     

不同海拔高度对灵山正路椒产量和品质的影响

为了全面了解花椒在不同海拔下的生态适宜性,以四川省冕宁县选育认定的灵山正路椒为材料,在冕宁县1 800、2 000、2 200、2 400、2 600、2 800 m 6个海拔梯度条件下,调查研究不同海拔高度对灵山正路椒的物候期、品质、产量、经济效益的影响。结果表明:物候期随海拔的升高而向后延迟;品质、产量在海拔1 800~2 600 m范围内与高度呈正相关,之后降低;经济效益在海拔1 800、2 000 m时最高。     

大兴安岭地区珍稀野生草本花卉引种驯化

大兴安岭地区地处高寒地带,年平均气温-2℃,极端低温气候导致了该地区城市绿化树种非常单一、绿化花卉资源极度缺乏.为此,我们从2011年开始,先后有目标、有计划的引进珍稀野生草本花卉进行驯化试验,初步筛选确定了观赏价值高、适应性强的优良品种5个,即百合、柳兰、轮叶沙参、石竹、芍药.     

武汉市农村种植户综合污水污染指标研究

指出了随着武汉市农村地区农副产品加工和水产、牲畜养殖的规模化发展,农村生活污水和生产废水的排放量与日俱增。随机对武汉市农村地区6个村庄,每个村庄3户农家的水样进行了取样和检测,分析了水质的COD、BOD、T N、T P、T SS ,结果表明：各地区水质特征基本吻合,整体波动幅度不大,提出了使用STCC工艺处理武汉市农村种植户综合污水的方案。     

内廊式建筑热压诱导通风模式的研究

指出了基于热压通风原理的被动式诱导通风是一种有效的绿色建筑节能策略,分析了常规热压通风应用模式及存在的问题,在此基础上,针对内廊式建筑的特征及气候适用性,提出了一种具有生态效能的热压诱导自然通风模式,探讨了该通风模式的工作原理、应用特性,并说明了其节能设计上的可行性.此结果为深入研究和应用热压自然通风新技术提供一定的思路.     

贵州毕节试验区森林防火研究

本文应用ABC分类控制分析法,对毕节试验区2004年~2013年森林火灾发生态势、规律进行分析,总结出从2004年到2013年,试验区森林火灾发生起数、发生率、控制率、受灾率总体呈下降趋势,而且2011年后稳定在低水平;引发森林火灾的主导因子是区内每年2~3月烧灰积肥、祭祀用火。并提出了森林火灾预防的对策措施。     

Identification and pathogenicity of Cryphonectriaceae species associated with chestnut canker in China

Cryphonectriaceae species cause serious canker diseases on chestnut, oak and eucalypt trees. Recently, canker symptoms with typical orange fruiting bodies were observed on Chinese chestnut and oak trees in Hebei, Hubei, Shaanxi and Shandong Provinces in China. In the present study, isolates of these fungi were identified based on phylogenetic and morphological evidence, and their pathogenicities were tested on detached chestnut (Castanea mollissima) branches. DNA sequence comparisons of the internal transcribed spacer (ITS) regions and two regions of β-tubulin (TUB1/TUB2) indicate that these isolates represent five species in the Cryphonectriaceae, viz. Cryphonectria japonica, Cryphonectria parasitica, Aurantiosacculus castaneae sp. nov., Cryphonectria neoparasitica sp. nov. and Endothia chinensis sp. nov. The sexual morph of Aurantiosacculus is discovered for the first time and can be distinguished from the other genera in Cryphonectriaceae by dark brown ascospores and tubiform appendages at both ends. Cryphonectria neoparasitica sp. nov. is different from the other Cryphonectria species by its aseptate ascospores. Endothia chinensis sp. nov. is the sole species in Endothia infecting the host genus Castanea. Additionally, it is much smaller than E. gyrosa and narrower than E. singularis in ascospores. The inoculation results showed that these five Cryphonectriaceae fungi isolated from chestnut or oak are all pathogenic to tested chestnut branches. Cryphonectria parasitica appears to be the most aggressive fungus, followed by C. neoparasitica sp. nov., C. japonica, E. chinensis sp. nov. and A. castaneae sp. nov.